核酸检测结果怎么用

新冠肺炎病毒仍在全球肆虐，随着复工复产复课的加速推进，新冠病毒核酸检测成了常态化检查指标，希望通过该项检查排除和发现新冠肺炎的感染者。今天我们就来科普一下什么是核酸检测？

新冠肺炎全球大流行的背景下，我们在复工复产复课过程中可能会被要求进行新冠肺炎的检测，对于这些检测技术的了解以及检测结果的解读是相当重要的。主要的方法是SARS-CoV-2病毒逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）。

一、核酸检测方法（RT-PCR）

简易流程示意图

1.检测样本获取：新型冠状病毒主要入侵呼吸道，所以一般可通过咽拭子、鼻拭子、痰液、粪便等进行取材，临床主要是取咽拭子为主。除鼻咽拭子外，其他标本的PCR阳性结果出现时间不同。在一项研究中，96名受感染者中有55名（57%）在粪便中检测到PCR阳性，而在鼻咽拭子阴性后的粪便中，PCR阳性率保持在4-11天，但与临床严重程度无关。在205例确诊为COVID-19感染的患者中，RT-PCR阳性率最高的是支气管肺泡灌洗标本（93%），其次是痰（72%），鼻拭子（63%），咽拭子5例（32%）。

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2.提取RNA：病毒的遗传物质主要为核酸，包括核糖核酸RNA和脱氧核糖核酸DNA。遗传物质就像人类的指纹一样，识别了DNA或RNA就可知道病毒是哪一类。为了检测新冠肺炎病毒RNA，首先得把所有RNA都从患者的标本中提取出来。细胞和组织样本提取的方法是一样的，常用的方法是TRIzol提取法，用到的试剂有TRIzol、氯仿、异丙醇、乙醇。

3.模板PCR扩增：既然已经提取了病毒RNA直接检测不就可以了吗，为什么还要进行这一步呢？PCR扩增的目的是将微量的RNA经过2的N次方进行放大，这样更便于我们检测目标RNA。但是，PCR扩增的模板必须是DNA，所以要想检测新冠肺炎病毒RNA，必须先将其反转录（逆转录）为cDNA，然后加入试剂材料让其以2的N次方进行复制。为了实时动态的检测这一过程，检测者可以在反应体系中加入荧光探针或者荧光染料，随着DNA每复制一次，荧光强度也会随之增加，我们通过检测荧光强度就可以推算出原始RNA的浓度了。这就是核酸检测的核心技术实时荧光定量PCR。

（遗传学中心法则）

4.核酸检测结果的解读：荧光定量PCR中一个重要的概念是Ct值，即荧光值达到阈值时候的PCR循环次数，跟初始模板的量呈反比，即Ct值越大病毒的含量就越少，Ct值越小病毒的含量就越大。与模板起始拷贝数的对数存在线性关系。我们利用已知起始拷贝数的标准样品就可以描述出标准曲线y=aX+b，y代表Ct值，X为起始拷贝数的对数，a、b为常数。这样我们只要测出检测样本的Ct值，带入曲线就可以算出病毒的量了。同样的标本进行2次以上的检测，最后判断检测结果是阳性还是阴性。

PCR中Ct值的确定

在大多数有症状的COVID-19感染者中，鼻咽拭子中的病毒RNA在症状出现的第一天就可以检测到，并在症状出现的第一周内达到高峰。临床检测时Ct值小于40为PCR阳性。这种阳性结果从第3周开始下降，随后消失。然而，重症住院患者的Ct值低于轻症患者的Ct值，并且PCR阳性可持续到发病后3周，而大多数轻症患者会产生阴性结果，PCR阳性结果只反映病毒RNA的存在，并不一定表示存在活的肺炎病毒。在某些情况下，即使在第一次PCR检测阳性的6周后，RT-PCR仍能检测到病毒RNA。少数病例在24小时内连续两次PCR检测阴性后也呈阳性。这些检测结果的不确定性，使得疾病控制和预防中心（CDC）利用“基于症状的策略”来判断新冠肺炎的传染性，如果“在康复后至少3天（72小时）未出现发热且没有使用退烧药物，这才被被定义为退烧，医护人员才可以回到工作岗位。

核酸检测与抗原检测有何区别

新冠检测值一般是指新型冠状病毒核酸检测CT值，正常范围是≥35。若新型冠状病毒核酸检测CT值＜35，应该考虑感染新型冠状病毒。

新型冠状病毒核酸检测时，CT值是判断核酸检测阳性的标准，可称为循环阈值。一般情况下，新型冠状病毒核酸检测CT值越大，需要较多的循环数才能扩增出新型冠状病毒，说明病毒的含量越少。新型冠状病毒核酸检测CT值越小，需要扩增的循环数越少，说明病毒的含量越高。

新型冠状病毒核酸检测CT值≥35，说明体内病毒含量较少或者没有病毒存在，结果为阴性，属于正常情况，无需过于担心。如果新型冠状病毒核酸检测CT值＜35，说明体内病毒的含量比较多，通常为阳性，具有较强的传染性，需要立即给予隔离，以减少疾病的传播。还需要严密观察病情，一旦症状加重，需要及时评估病情，调整治疗方案。

1、检测时间不同：核酸检测主要采用咽拭子、鼻拭子等采集样本，检测结果大概需要数小时才能出来；而抗原检测结果一般需要10-15分钟就能出来。

2、检测方式不同：抗原检测是利用抗原与抗体特异性结合的原理；而核酸检测是通过PCR技术来分析样本中是否存在病原体RNA。

3、准确率不同：核酸检测灵敏度、准确率很高，是新冠病毒的主要诊断依据；而抗原检测灵敏度不如核酸检测，可能会因为环境等原因出现假阳性反应，因此一般只能作为一种补充手段，常用于筛查，不能作为诊断依据。

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