两类核酸的组成成分有哪些异同点? 考试的简答题!
相同点:二者都是由核苷酸单体通过磷酸二酯键形成的长链分子.
不同点:
脱氧核糖核酸由脱氧核糖核苷酸组成,其主体为脱氧核糖,碱基包含四种,分别为鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤.
而核糖核酸由核糖核苷酸组成,其主体为核糖,碱基包含四种,分别为鸟嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤.
1 核酸变性
?核酸的变性主要指DNA的变性。核酸变性时双链间的氢键断裂成单链,但并不涉及共价键的断裂。引起DNA变性的因素很多,如高温引起的热变性,酸碱改变引起的酸碱变性等。
?2 DNA热变性现象
?当把DNA的稀盐溶液加热到80℃~100℃时,双螺旋结构即发生解体,两条链分开形成无规则线团。同时,一系列物化性质发生改变:260nm处紫外吸收值升高,粘度降低,浮力密度升高。由于二级结构的丧失,也失去了部分或全部生物活性。
?3 增色效应和减色效应
?当DNA分子加热变性后,其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应。变性DNA复性后,在260nm处的吸收值减少的现象称为减色效应。
?4 DNA的复性
?变性DNA在适当条件下,又可使两条彼此分开的多核苷酸链重新结合成为双螺旋结构,以上过程称为复性。复性的条件是:(1)变性DNA只有在缓慢冷却时才能复性。如果DNA在沸水浴中加热数分钟后,骤然在冰浴中冷却至低温,DNA不能复性,这也是防止复性的方法。(2)DNA浓度愈大,复性愈快。(3)DNA片段愈长,复性也愈快。
?5 核酸分子杂交
?DNA杂交是指不同来源的DNA经热变性后,在慢慢冷却的复性过程中,由于异源DNA之间的某些区域有相同的序列,可以彼此结合形成杂交分子,称此方法为DNA分子杂交。DNA也可与互补的RNA之间发生杂交,形成DNA—RNA杂交分子。
?核酸杂交可在液相或固相上进行,由于硝酸纤维素膜只吸附变性DNA,故常用硝酸纤维素膜作核酸杂交的支持介质。
?6 如何应用核酸的紫外吸收
?由于嘌呤和嘧啶在240nm~290nm紫外线处表现出强烈的吸收性能,所以可以利用紫外分光光度计测定碱基、核苷、核苷酸和核酸,它们的最大吸收峰值在260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性,可以此作定性定量检测。
?在研究中常用紫外分光光度计检测少量的DNA和RNA,纯样品和不纯样品的检测根据是:
?纯DNA:OD260/OD280=1.8
?纯RNA:OD260/OD280=2
?样品中如含杂蛋白及苯酚(它们在紫外也有吸收),比值明显降低,故不纯样品不能用此法定量。
?7 熔解温度(Tm)是指什么?受什么因素影响?
?DNA变性的特点是爆发式的,变性作用发生在一个很窄的温度范围内。通常把DNA双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔解温度(Tm)或称熔点。DNA的Tm值一般在70℃~80℃之间。
?影响DNA的Tm值的因素有:
?(1)DNA的均一性。均一性愈高的样品,熔解过程愈是发生在一个很小的范围内。
?(2)G—C之含量。由于G—C之间有3个氢键,因此G—C含量愈高,其Tm值也愈高,成正比关系。所以测定Tm值,可推算出G—C对的含量,其经验公式为:G—C%=(Tm-69.3)×2.24。
?(3)介质中离子强度的影响。一般来说,离子强度愈低的介质中,DNA的熔解温度也较低,且熔解温度范围也较窄。所以DNA制备应保存在较高浓度的缓冲液中,常在1mol·mL-1的NaCl溶液中保存。
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