谁知道ELISA,Western Blot,免疫组化 这三个比较有什么区别,越详细越好!谢谢了,我给加分
免疫组化
是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa(酶联免疫吸附试验)
用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析,其灵敏度非常高。
western bolt
先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具,免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。
以下western和Elisa的区别不是原创,是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带,但是定量比较烦
elisa可以直接读出浓度,但是如果抗体有非特异性结合,那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到
ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响
WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而Elisa不行。
WB一次处理量就是一块胶版,10-20个样品最多了。Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
WB操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
我也是最近才开始了解这几种实验技术,答案仅供参考哟~
血凝抑制试验
有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞,称为血凝现象,血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验,一种测定抗原或抗体的技术。即加入特异性抗体或特异性抗原后,使原有的血凝反应被抑制。
正常值
试验后的结果呈阴性。
临床意义
异常结果:相应抗体与病毒结合后,阻止病毒表面HA与红细胞结合,常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查,也可用于鉴定病毒型与亚型。需要检查的人群:新生儿和孕妇者有需要,和带有相关病毒的患者,以做医疗的测定。
酶联免疫吸附剂测定
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验,本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。
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