关于引物、探针和微卫星片段的区别及在实验中的应用
第一个问题:引物是用来扩增DNA序列的,因为DNA的合成必须3-OH,也就是说核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸,引物就是用来提供3-OH的。
探针是根据碱基互补的原理,用来与特定的DNA片段做杂交的,以此对特定的DNA片段进行检测,如Southern杂交,用的就是探针。
只要是符合要求的DNA片段都可以用来做探针和引物,探针和引物是两个完全不同的概念,他们都是DNA或者RNA,只是用的方法不一样。
说的简单些:引物是用来扩增DNA序列,探针用来与特定的DNA片段做分子杂交的
第二个问题:微卫星引物是微卫星两端的侧翼序列,是用来扩增微卫星片段的。
如果你做的事荧光定量PCR,其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的,只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西,探针法还需要taqman探针,这个探针的设计是比较有讲究的,并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计,一般使用相关软件进行。
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