关于细胞染色 比如 线粒体、高尔基体、细胞核、细胞质什么的,它们染色的染色剂是什么?原理又是什么?
1. 线粒体、高尔基体、细胞核、细胞质这些都是细胞内的物质,这些物质都被细胞膜和细胞壁保护着的,染料是不能进入,所以被染色的细胞都是死亡了的。
2.细胞核都含有遗传物质,染色可以用苏木精。这是至今为止最优良的细胞核染色剂,优点是几乎所有植物的任何组织中的细胞核都能被它强烈染色。苏木精本身不是染料,起作用的是他的氧化产物苏木精素,依靠硫酸铁按或硫酸铝按等媒染剂来染色。常用配方是1铁矾-苏木精,2醋酸-铁矾-苏木精。
3.细胞质染色:细胞质内包含了细胞液、线粒体、高尔基体等染色原理和试剂是一样的。最常用的碱性品红,顾名思义,它呈现碱性,而染色质也呈现碱性,所以在配置品红染液时在其中加入醋酸或盐酸,它们一方面与品红牢固结合,一方面与染色质结合,达到染色目的,且染色效果好,细胞质一般被染成淡紫红色,或无色,而细胞核被染成深紫红色或紫色,对比十分强烈。有两个重要的配方,一个是石碳酸-品红,一个是锡夫试剂,网上很容易查到具体配方。
常用的还有其他的试剂
1、斐林试剂配制:1)甲液质量浓度为 0.1g/ml,取10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml2)乙液质量浓度为0.05g/ml,取5gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用:鉴定还原性糖:C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。还原性糖与斐林试剂发生作用,生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。2、班氏尿糖定性试剂配制:称取17.4克无水硫酸铜(CuSO4)溶解于100毫升热蒸馏水中,冷却后,稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠(Na2CO3)100克,加蒸馏水600毫升,加热使之溶解,冷却后,稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中,搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用(为了防止氢氧化铜沉淀的生成,故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂,它能与铜离子形成可溶性络盐)。使用方法同斐林试剂,所不同的是班氏试剂可长期使用。3、双缩脲试剂配制:A液:质量浓度为 0.1g/ml,取10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100mlB液:质量浓度为0.01g/ml,取1gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml使用时,先加A液,后加B液作用:鉴定蛋白质,蛋白质与双缩脲试剂发生作用,可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。4、苏丹Ⅲ配制:取0.1g苏丹Ⅲ,溶解在20ml95%酒精中作用:鉴定脂肪,脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘**(或被苏丹Ⅳ染成红色)。5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液(1:1)。作用:用于洋葱根尖的解离,即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液(或醋酸洋红溶液)配制:是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用:使细胞核内的染色体着色,便于观察。7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用:观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液配制:将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成作用:(1)用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察;(2)用于检测水中细菌情况,根据亚甲基蓝褪色情况,判断水质被细菌污染情况。是活体染色剂。9、丙酮是有机溶剂,在叶绿体中色素提取时,用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代,不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热10、层析液配制:由20份石油醚(在60~900C下分馏出来的)、2份丙酮和1份苯混合而成。是一种脂溶性很强的有机溶剂,叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同:溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快;溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。代用品:93号汽油、四氯化碳11、SiO2、CaCO3加入少许SiO2是为了研磨得充分;加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。12、碘液配制:取2gKI ,溶解在5ml蒸馏水中,再加1gI,待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色,必须保存在暗色玻璃瓶里。作用:用来测定淀粉,淀粉遇碘后,形成紫色的复合物。13、二苯胺配制:称取1.5g二苯胺,溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。临用前,在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。作用:DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。14、NaOH:用于吸收CO2(验证光合作用需要CO2)或改变溶液的pH,15、Ca(OH)2:鉴定CO2(验证呼吸作用产生CO2)。16、NaHCO3:提供CO2等。 我再补充一个:台盼蓝(Trypan Blue,也称Direct blue 14):一种死细胞染色用色素化学名:3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸),四钠盐分子式:C34H24N6Na4O14S4分子量:960.81CAS Number: 72-57-1外观:黑褐色结晶粉末摩尔吸光度:>69,000(在606nm附近)染色原理:细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性, 通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试(dye exclusion),Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞,并可使用细胞计数器进行计数。溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深蓝色。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟,在显微镜下观察即可。应用于细胞凋亡:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的,此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。储存条件:常温保存注意事项:1. 台盼蓝对人体有毒2. 台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
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