做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因

你说的应该是real time PCR吧，注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。

常说的qPCR，qRT-PCR，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值

但是呢，由于之前RNA提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。

比方说，A基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。

这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1，也就是表达量为2倍的关系。

这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin gapdh hprt等等。

当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组DNA做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。

你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。

原创内容，码字不易，万望采纳。

管家基因是指所有类型组织细胞在任何时候都需要表达的基因。由于管家基因是生命活动必需的基因，表达相对稳定，差异小。所以在基因芯片技术中根据各芯片的管家基因可以得出标准化系数进行标准化较正；管家基因在所有的细胞中都有表达，因此有关管家基因的概念有助于分析差异表达基因的表达情况，进而进行差异表达基因的克隆；通过管家基因，能比较不同样本中某种mRNA的水平。在进行基因分离时，可通过不同组织间基因的比较，扣除相同部分(管家基因)后得到差异表达基因，从而得到不同组织间基因表达。[考点]管家基因的概念及研究意义。管家基因是指所有类型组织细胞在任何时候都需要表达的基因。由于管家基因是生命活动必需的基因，表达相对稳定，差异小。所以在基因芯片技术中根据各芯片的管家基因可以得出标准化系数进行标准化较正；管家基因在所有的细胞中都有表达，因此有关管家基因的概念有助于分析差异表达基因的表达情况，进而进行差异表达基因的克隆；通过管家基因，能比较不同样本中某种mRNA的水平。

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