western blot和ELISA有什么差别

一、反应不同：

WB可以反映出分子量的信息，ELISA不能。

WB一般只能做到半定量，ELISA一般可以定量。

二、检测不同：

基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。

PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测， 而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等。

三、灵敏度不同：

灵敏度?一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。可操作性WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。

Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。

扩展资料：

现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。

经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

百度百科-蛋白质印迹法

1、原理不同：

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。

western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。

2、组织定位不同：

免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确，但是在组织定位上不如免疫组化。

扩展资料：

一、 免疫组化（SP法）操作步骤：

1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行。

2、缓冲液洗 3min／2 次。

3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10－15 分钟。

4、缓冲液洗 5min／2 次。

5、滴加 Ultra V Block ， 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

6、缓冲液洗 5min／2 次。

7、滴加一抗工作液 37 ℃孵育?1 － 2 小时。

8、缓冲液洗 5min／2 次。

9、 滴加 Primary Antibody Enhancer（增强子），在室温下孵育 20 分钟。

10、缓冲液洗 5min／2 次。

11、滴加 HRP Polymer（酶标二抗） ，在室温下孵育 30 分钟。

12、缓冲液洗 5min／2 次。

13、向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate） 中滴加 1－2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混匀后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分钟。

14、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

二、 western blot操作步骤：

1、SDS－PAGE试剂：见电泳实验。

2、匀浆缓冲液：1．0M Tris－HCl（pH 6．8）1．0ml；10％SDS 6．0ml；β－巯基乙醇 0．2ml；ddH2O 2．8ml。

3、转膜缓冲液：甘氨酸 2．9g；Tris 5．8g；SDS 0．37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。

4、0．01M PBS（pH7．4）：NaCl 8．0g；KCl 0．2g；Na2HPO4 1．44g；KH2PO4 0．24g；加ddH2O至1000ml。

5、膜染色液：考马斯亮兰 0．2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118 ml。包被液（5％脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1．0g 溶于20ml的0．01M PBS中。

6、显色液：DAB 6．0mg；0．01M PBS 10．0ml；硫酸镍胺 0．1ml；H202?1．0μl。

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