组织培养中污染的主要型别,特点和控制方法有哪些

组织培养中污染的主要型别,特点和控制方法有哪些

组培中的污染主要是细菌污染和真菌污染。细菌污染的主要特点是在材料附近的培养基中出现浑浊和云雾状痕迹。一般在接种后的1~2天即可发现。真菌污染的特点是培养瓶内往往会出现白，黑或绿等不同颜色菌丝块。一般在3~10天就能发现。控制的话，无非就是要在组培过程中要求严格的无菌条件和无菌操作。一般来讲组培污染无非以下几点原因：1，培养基灭菌不彻底。2，外植体消毒处理不完全。3，接种操作不规范，接种器械消毒不彻底。4，培养环境不清洁等。所以，如果注意以上几点，应该能够改善。

在植物组织培养中，微生物污染的途径主要有哪些, 怎样预防植物组织培养中的污染

防止污染的主要措施是：

(1 )改善环境条件。接种室与培养室要定期做好消毒与净化，接种前工作台或接种箱要开紫外灯30min以上。培养室的相对溼度应控制在70％左右，相对溼度太高时可以用抽溼机抽溼。

（2）接种人员的培训很关键，应严格执行无菌操作，对接种中所需的工具，必须经严格灭菌后才能使用。在超净工作台的操作区内，不要放入过多的待用材料，避免气流被挡住。还要定期检查超净工作台的工作质量[8]。

(3 )严查接种材料。淘汰被真菌与细菌污染的接种材料。

（4）经常检查消毒锅的灭菌质量，若发现问题要立即检修。消毒锅的压力表降到零后不能马上出锅，因冷热空气作用产生的负压效应，使外界环境的冷空气倒吸入已灭菌的培养瓶内引起真菌污染，为避免该现象的发生，消毒后培养瓶应待锅内稍冷却后才出锅[9]。

（5）检查培养容器是否存在问题。培养容器封口多用塑料盖、胶塞、棉塞、薄膜等，塑料盖用久了易老化，密封性差，也会造成污染。林盛等配制了一种“4号消毒液”对培养瓶瓶口进行消毒处理，可以把培养基污染率控制在0.3％以下[10]。

3 继代培养中污染的防治

初始阶段所获得的无菌材料理论上是无菌的，但在后期或继代培养中也会出现污染，这除了操作不慎带菌外，继代材料在培养室也可能被螨传播的真菌污染。这类污染可从两方面防止：（1）扩大繁殖时应有合理的程式。在获得了最初的无菌培养物之后应将其中一部分作为“原种”储存起来，分批繁殖和复检后再提供给大规模生产。（2）可通过在培养基中加入抗菌剂来防止[3]。许婉芳等将多菌灵用于金线莲组织培养的抑菌促生长，效果明显优于甲霜灵、甲基托布津及混合物，在含有多菌灵的培养基中生长的金线莲，不受微生物污染，灭菌率达100%，无白化苗，苗健壮[11]。

对植物中的内生细菌，由于它潜伏得较深，表面消毒方法无法将其消除，有时在外植体的初期培养中，包括前几代的继代培养，往往在培养基上不易被肉眼察觉，随着继代次数增加，菌量逐渐累积发展，才在培养基上显现出来[12]。黄小荣等则认为植物组培中细菌污染的原因是休眠细菌芽孢萌发的结果[13]。可以通过在培养基中新增抗菌素、茎尖培养、降低PH值等措施防止和减少细菌等内生菌污染。

王亦菲等在彩色海芋快速繁殖至4～5代时，新增200mg/L的青霉素GK，能有效抑制内生菌的生长，且不影响繁殖系数[14]。翟建中等在长春蔓的组织培养中，对了抑制内生细菌 Xanthomonas sp.，使用链霉素的作用大于庆大霉素和头孢唑林钠，培养基中同时使用二种抗菌素，有利于防治细菌的抗药性，能较长时期地控制细菌污染的发展，但链霉素剂量增高，会对植物产生毒性[15]。

在培养基中新增抗菌剂，选择合适的浓度非常关键，浓度低了效果差而浓度高又容易对植物产生毒害，影响增殖或使培养的材料变黑，出现死苗、白化苗等。两种或两种以上的抗生素结合使用可以防治细菌的抗药性。抗生素和多菌灵等一般不耐高温，需要采用过滤灭菌，在生产中新增起来很不方便，而苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钠等常用作食品中的防腐剂，能耐高温高压，在组培生产中使用比较方便。

植物材料中的内生菌也可采用反复茎尖培养的方法来脱除。因为致病菌在植物体内的分布是不均匀的，通过维管束传播，茎尖分生组织是不带菌的，通过反复的茎尖培养既可脱除内生菌又可脱病毒。

除了欧文氏菌属外，大多数细菌在介质PH小于4.5时不能生长。在紫苑属、鸢尾属、蔷薇属植物组织培养中，将培养基的PH值由5.8调至3.9～4.3，可防止大量的细菌污染[7]。胡庆等用低PH值（3.10）水培并改善容器通气条件，能使严重细菌污染的绿巨人团块正常增殖，对单株的生长无害，可生根的苗的比例比常规固培要高，基本解决了遭严重细菌污染后仍能带菌生产的问题[16]。

对已污染的培养物，有时因植物材料难得或重新发生要花费很多时间，也可切取较大的植株重新消毒接种。李春燕等用400或600万单位/L的青霉素无菌水溶液分别浸泡银白杨组培细菌污染苗60min或40min，可有效防治组培中的细菌污染。经处理过的苗继代培养时，不再重复出现细菌污染现象，且苗分化能力强，生根培养时，根系发达，移栽成活率高[17]。李颖等的实验研究证明，如果继代培养中只有真菌污染，采用3%的多菌灵无菌液浸泡0.5h以上即可，用无菌水冲洗后接种或不用无菌水冲洗直接接种都可消除真菌污染。如果在细菌污染和细菌、真菌同时污染的情况下，可采用 HgCl2消毒法，把污染的培养苗切割成较长的茎段作外植体，用自来水冲洗0.5h，再在超净工作台上用乙醇和HgCl2进行短时间的处理即可再度建立无菌苗培养体系[18]。

4 减少培养基中的有机成分

培养基中有机物的存在是污染产生的重要原因，去除有机物也是减少污染的一条途径。宋锋惠等在阿月浑子的组织培养中，除去培养基中的VB1、VB6、烟酸等（保留肌醇）有机成分，经 2～3代培养后，能抑制细菌生长，对丛生芽生长增殖没有影响。原因是这些都是某些细菌生长的必需物质，除去这些有机物后，细菌无法生长发育，逐渐死亡减少[19]。由日本的古在丰树教授首创的植物无糖组培快繁技术则完全除去了培养基中的有机成分，输入可控制量的CO2气体作为碳源，并通过控制环境因子，促进植株光合作用速率，使之由异养型转变为自养型，因而植株长势良好，污染率明显降低[20]。由于去除了糖，组培苗由玻璃瓶内培养改为箱式大容器培养，也可以整个培养室作为培养容器，甚至不需要严格的无菌操作，也极少污染，这项技术至少在许多植物组培苗的促根阶段应用是十分成功的。

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口罩的阻尘效率的高低是以其对微细粉尘，尤其对 2.5微 米以下的呼吸性粉尘的阻隔效率为标准。因为这一粒径的粉尘能直接入肺泡，对人体健康造成的影响最大。纱布口罩，其阻尘原理是机械式过滤，就是当粉尘冲撞到纱布时，经过—层层的阻隔,将一些大颗粒粉尘阻隔在沙布中。对于一些微细粉尘，尤其是小于2.5微米的粉尘，就会从纱布的网眼中穿过去，进入呼吸系统。防尘口罩，其滤料活性炭纤维毡垫或无纺布组成，那些小 于 2.5微米的呼吸性粉尘在穿过此种滤料的过程中。

组织培养中灭菌的方法主要有哪些

1.溼热灭菌法通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,穿透力强,温度高,灭菌效果最好.注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.2.紫外线 杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与溼度等因素有关.我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2.一般紫外灯使用超过100h,则应更换.表面有尘土,降低灭菌效果.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对溼度40%~60%为宜.3干热灭菌法.灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于工具灭菌,在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌,火焰灭菌通常用于无菌操作中,将试管口、玻璃瓶口、矽氟塑料塞等反复通过火焰数次,利用火焰对管口等进行灭菌,阻止管口污染,作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段.4干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,均可在烤箱内干热灭菌.通常加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃,玻璃量具易变形.降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底

在植物组织培养中，造成组培材料污染的因素都有哪些

材料除菌不彻底

培养基灭菌不彻底

容器灭菌不彻底

操作不规范

接种完成后没密封好

植物组织培养中哪些因素可导致污染的发生

污染原因1.1

外植体

①年龄、种类和大小。成年植株带菌多；生理年龄老的材料带菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染；室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多[1-2]。

②取材时期和部位。雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳光最强时紫外线较强，杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多[1]。

③灭菌效果。外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差，使外植体带菌。1.2

组织培养过程中各技术环节操作不规范①培养基。使用长菌的母液配制培养基；培养

基pH值高、新增的有机成分均可导致细菌污染；培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器使培养基污染；封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；橡皮筋长时间在日光灯照射下也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入培养容器；灭菌方法不当导致培养基污染；灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；灭菌时间达到后立即开启灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部杂菌有可能被倒吸入容器中[1]；过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入培养基后造成污染。

②培养容器和接种器具。培养容器不清洁；培养容器被污染后灭菌不彻底，再次使用时导致污染；高压灭菌锅或烘箱内培养容器、接种器具装得过满，影响灭菌效果；培养容器、接种器具灭菌时间过短导致灭菌不彻底；灭菌结束后立即开启高压灭菌锅或烘箱，强烈的冷热对流会导致冷空气被吸入包扎层内而重新造成污染带菌[1]。

③接种人员。过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩；不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污染；培养容器中接种的培养物过多；超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭菌效果差；接种时说话或咳嗽会拨出大量细菌；操作时手超出工作台面；手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生物落入培养容器中；开启培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘；接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污染了材料；没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中[3]；中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿。服装、帽子、口罩、拖鞋长期穿戴后较脏，表面有大量灰尘，未经清洗反复穿戴后造成污染。

④接种室和培养室。人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌，尤其是接种过程中非工作人员的进出；接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多；超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不当造成失效；组培室、接种室门窗封闭不严，苍蝇等趁机飞入，利于杂菌传播；培养室面积大易污染，室内温度高、空气溼度大，菌类繁殖旺盛也会加重污染

植物组织培养中哪些因素可导致污染的发91？如何防98污染

污染 （汉语词语） 编辑

污染，汉语词语，是指使沾上脏物或有害物质或受坏思想的影响。

中文名 污染 外文名 pollute 拼 音 wū rǎn 注 音 ㄨ ㄖㄢˇ 同义词混浊 浑浊 玷污 反义词

1. [contaminate;be *** ear;defile;stain]∶使沾上脏物或有害物质

放射物污染了整个地区

2. [pollute]∶指受坏思想的影响

心灵受污染

3. [ *** ear;involve]∶指诬陷或牵累[1]

在植物组织培养中，哪些因素可导致污染的发生

一，外植体没处理干净造成污染

二，污染的培养皿没有处理好造成二次污染

三，镊子手术刀等工具污染，培养基没灭菌，工作台没灭菌

四，接种时没有靠近火焰瓶口掉落的菌，操作不熟练增加污染率

五，实验员说话打闹，工作密集

六，实验室大规模污染

大气污染控制方法有哪几种,其特点如何

大气污染控制可以分为大气除尘，除杂，除臭，消毒等

除尘有布袋除尘、静电除尘、喷淋等

除杂为废气处理，如脱硫，有溼法、半干法、干法

除臭有生物除臭、生物滤塔除臭、活性炭除臭等

汽车噪音污染的控制方法有那些？

这个好像没什么方法 看你是在那个角度 如果在车里 那就只能改一下排气管单效果不一定能好

营养培养基有哪些

（1）植物组织培养过程中，常选用处于未分化状态的细胞诱导形成愈伤组织，再先后接种在不同的培养基上，诱导形成芽和根．其中生长素和细胞分裂素能促进细胞分裂分化，在培养的不同时期对两者的比例会有不同要求，细胞分裂素和生长素的比值接近于1时诱导形成愈伤组织，再分化过程中，生长素比例高时促进根的分化，细胞分裂素比例高时促进芽的分化．

（2）由甲图可知，不加蔗糖的培养基中的植株在相同光照强度下光合速率和光饱和点要比加蔗糖的培养基高．

（3）乙图表示一昼夜中CO2浓度变化曲线，b-c段上升缓慢的原因是凌晨温度较低，酶活性降低，呼吸速率较慢导致CO2释放减少所致；c-d段急剧下降是因为光合作用消耗大量CO2所致，d点时光照强度不再是限制光合作用的因素，CO2浓度才是影响光合速率的因素，而大气中CO2浓度比瓶内高，所以更有利于提高光合速率．

（4）生产实践中，在试管苗移栽阶段，当试管中的植株长到5-10cm时，可先打开试管瓶口3-5天，使其适应试管外环境；从甲乙两图中可以得出不加蔗糖的培养基，适当增加CO2浓度，延长光照时间，适当增加光照强度等可以提高光合作用强度．

（5）在叶肉细胞中，CO2的固定发生在光合作用的暗反应过程中，场所为叶绿体基质；CO2的产生发生在有氧呼吸的第二阶段，场所为线粒体基质．

（6）表格中暗处理后的重量变化即为呼吸速率，表中看出29℃时呼吸速率为3mg/h，此时为最高．27℃时光照后暗处理前重量变化为+3mg，此时经过了1h的光合作用，两小时的呼吸作用，因此绿叶的净光合速率=“3+1=4“mg/h．光合速率的强度等于净光合作用的强度与呼吸作用的和，即30℃时呼吸速率为1mg/h，光合作用强度为1+1×2=3mg/h．

故答案为：

（1）未分化? 细胞分裂素和生长素浓度 愈伤组织

（2）光合速率? 光饱和点?

（3）温度较低，酶的活性降低，细胞呼吸较弱，产生的CO2较少? c-d段光照的增强，光合作用增强，消耗大量的CO2，所以CO2浓度急剧下降? 升高?

（4）打开试管瓶口 无糖培养基? 增加CO2浓度（答增加光照强度也给分）

（5）A

（6）29℃4? 3

营养是一切生物生命活动的物质基础。黑木耳赖以生存的营养，完全依靠菌丝体从基质中吸取。它包括碳素营养、氮素营养、维生素、矿物质元素和微量元素。首先碳素是黑木耳最重要的营养来源，一般木屑中纤维素含40％，木质素含24％，半纤维素中多聚戊糖含20％。黑木耳菌丝体在分解、摄取养料时，能不断地分泌出多种酶，将大分子化合物分解成黑木耳菌丝体易于吸收的各种营养物质。还可利用的有葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等，这些糖类用量不能太多，超过5％则对黑木耳菌丝的生长有抑制作用。其次氮素是合成蛋白质和核酸所必不可少的主要原料。主要氮源有蛋白质、氨基酸、尿素、蛋白胨等。生产中常用的氮源为马铃薯浸汁、酵母汁、玉米粉、蛋白胨、米糠和麸皮等。

营养物质：应含有氮源、碳源、无机盐类和生长因子等。

（1）蛋白胨　提供氮源。

（2）肉浸液　可提供氮源和碳源。

（3）牛肉膏　营养价值低于肉浸液，但因无糖可用作肠道杆菌鉴别培养基的基础成分。

（4）糖类　除葡萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的基本成分外，其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反应。

（5）血液　既含有营养物质，又能提供生长因子，所以用于培养营养要求较高的细菌。另外，还可根据细菌在血液培养基中的溶血现象而进行鉴定。

（6）无机盐类　提供各种元素，如：钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。

（7）鸡蛋和动物血清　仅用于制备一些特殊的培养基。如培养结核分枝杆菌的鸡蛋培养基和培养白喉杆菌的吕氏血清培养基等。

（8）生长因子　常在培养基中加入维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。

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