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什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理?

是丫丫呀1年前 (2023-12-16)阅读数 6#综合百科
文章标签菌株质粒

选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物。分散酵母菌和霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长。

鉴别性培养基是在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物。如EMB即伊红美蓝乳糖造就基。大肠杆菌分解乳糖孕育发生大量混淆酸,可染上酸性伊红,伊红又和美蓝结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。

Xl1-Blue菌株

基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。

特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。

用途:分子克隆和质粒提取。

什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理?

BL21(DE3)菌株

基因型:F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。

特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。

用途:蛋白质表达。

BL21(DE3)ply菌株

基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。

特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。

用途:蛋白质表达

DH5α菌株

基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–

特点:一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

JM109菌株

基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。

特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。

用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

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