凝胶过滤层析和电泳的异同
记得最开始上生物化学的时候,老师问我凝胶电泳和凝胶过滤有什么区别,当时我回答一个用电,一个不用电。。。。。凝胶过滤又称为分子筛,是用一根柱子里面有填料,填料是一些粒子,粒子里面有很多的孔,分子比较小的能进入到粒子的孔里面,二分子比较大的就会在粒子旁边流下来。所以用一些蛋白或者是多糖过分子筛,分子大的会先流下来,分子小的后流下来。。。凝胶电泳是运用电泳仪,让蛋白质或者是核酸在凝胶中移动,移动的速率和分子的大小成反比,分子大的跑得慢,分子小的跑得快。。。。简单地说,就是这样。。。。
凝胶电泳或称胶体电泳是一大类技术,被科学工作者用于分离不同物理性质(如大小、形状、等电点等)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。 该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆技术操作。
常用的凝胶电泳包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达107bp的DNA片段。
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