外源基因进入细胞后，能和染色体发生同源重组，把原有的基因片段取代吗

基文库genelibrary用重组DNA技术某种物细胞总DNA或染色体DNA所片断随机连接基载体,转移适宿主细胞,通细胞增殖构各片段性繁殖系（克隆）,制备克隆数目某种物全部基都包含内情况,组克隆总体称某种物基文库.同定义适用于某种物线粒体DNA或叶绿体DNA基文库.由于制备DNA片段切点随机,所每克隆内所含DNA片段既能或几基,能基部或除完整基外包含着两侧邻近DNA顺序.基文库与基库概念同.基库指某物群体全部基.基文库与基克隆概念区别,基克隆包含某些特定基或DNA片段克隆.基文库包含着数众克隆,建供随选取其任何基克隆用.基文库建立使用70代早期重组DNA技术发展.离基,特别离真核物基,1974起相继建立肠杆菌、酵母菌、蝇、鸡、兔、鼠、、豆等物及些物线粒体叶绿体DNA基文库.基文库建立使遗传遗传工程研究进入新期.基文库建立基文库应包含克隆数目与该物基组克隆DNA片段度关.原核物基组较,需要克隆数较少；真核物基组较,克隆数需相应增加,才能包含所基.外,每载体DNA所允许插入外源DNA片段度较,则所需总克隆数越少；反则所需数越.基文库总克隆数较少,则筛选基虽比较容易,给析造困难,片段度增加.要使每克隆DNA片段缩短,须增加克隆数,所建立基文库前应根据研究目确定DNA片段度克隆数目.L.克拉克J.卡邦1975提统计公式计算某基文库所应包含克隆数目.建立基文库,任何DNA片段都随机基础克隆.公式,P建基文库能选某基概率,数字由工作者根据需要选定.?该基文库每克隆所含外源DNA片段平均度,根据该物基组所用载体容纳外源DNA片段度决定.G该物基组,基组DNA片段度单位用道尔顿或碱基表示.N基文库所应包含克隆数目.制备某哺乳物基文库,假若选某基概率定99％,每克隆内所含外源DNA片段平均度2×104碱基,基组3×109碱基,则表表示基组(G)、片段(?)、选某基概率(p)与总克隆数(N)四者间关系.产DNA片段要求切点随机性高,使任基都能完整克隆,并且两侧都留粘性末端利于DNA片段间连接.机械剪切优点随机性高,所片段两端没粘性末端,较便与载体连接.用限制性核酸内切酶酶解随机性较差,两端粘性末端,便于载体相连接（见重组DNA技术）.基载体通根据待克隆DNA片段度选择.制作原核物基文库,基组较,DNA片段切短些,选用质粒pBR322等作载体.真核物基内部称内含非编码区,使基度比实际编码部要,基文库待克隆DNA片段便应些,保证完整基.通采用载体经改建噬菌体λCharon4A（度462kb,克隆外源DNA度8.2～22.2kb）粘性质粒(例pHC79,度6.4kb,容纳外源DNA度37～50kb)等.经剪切DNA片段通噬菌体T4连接酶或肠杆菌连接酶与载体DNA共价连接,使杂种DNA.用质粒作载体重组DNA通转化引进细胞.用λ噬菌体DNA作载体重组直接经转染引入细胞效率较低；般需先行离体包装,即重组DNA包噬菌体外壳,再通噬菌体染重组DNA引入敏细菌细胞.效率比转染高几十几百倍.基文库保存利用效保存基文库,通细菌繁殖使包含各特定DNA片段细菌增.液体培养适用于目,各细菌存繁殖能力同,各克隆保存机相等.固体培养基每细菌单独形菌落,各细菌并相互干扰竞争,利于全部克隆保存.形每菌落约包含107细菌,基文库所克隆几乎都扩增107倍.培养皿细菌全部洗加保存,便需要取任何克隆.基文库筛选某克隆用杂交.首先属于文库细菌或噬菌体较低密度接种培养皿取相散菌落或噬菌斑,用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿滤膜相应位置具相同克隆.同另行制备供杂交用探针.筛选真核物某种基,转录产物mRNA经反向转录（见则）合相应互补DNA(cDNA),再加入用32P标记核苷三磷酸,用DNA聚酶I切口移位制同位素标记探针.探针DNA硝酸纤维滤膜菌落或噬菌体别进行变性处理,进行杂交.再X光底片覆盖经处理滤膜进行放射自显影.培养皿找X光底片黑点相应菌落或噬菌斑,些菌落或噬菌体便包含着所需要基.经扩增便能量细菌或噬菌体,离所需基DNA片段.应用与前景建立使用基文库离基,特别离高等真核物基效手段.哺乳物基组3×109碱基,直接细胞提取并离某特定基DNA片段技术困难.基文库,同DNA片段都别同克隆扩增,要该基探针存,则许克隆筛选所需克隆项比较简单工作.外基文库克隆DNA都基组各种随机顺序片段,某些DNA片段包括基外部邻近甚至互相跨叠序列,所基文库特别利于研究状态基顺序组织.例曾基文库离含血红蛋白β链基克隆,取该基DNA并进行析,发现δβ链基连锁,二者间相隔几千碱基,且内部都两内含.基文库应用体发育研究.例芽孢杆菌形芽孢菌体离mRNA,并用同位素标记做探针,用些探针芽孢杆菌基文库离芽孢形程基,助于发育程基调控进行研究.基文库应用高等物,例基定位工作.基文库产实际取所需要基种重要.基文库关技术建立及应用虽几历史,作重组DNA技术应用重要面已经显示解决遗传理论问题遗传工程实际问题巨潜力.

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