GFP与YFP有哪些区别
YFP和GFP其实是序列基本相同的两种蛋白,YFP就是把Thr203以Tyr取代,GFP则不发出绿色荧光,而发出较长波长的**荧光,也就是YFP。因此两者最大的区别则是发射波长了。
我觉得这两种蛋白标记应该都没有问题,只是有几个问题应该考虑:
1. 应该标记在C端,一般的核定位序列均位于蛋白N端,如果将GFP或者YFP标记在N端很可能影响核定位;
2. 取决于你的核探针,如果是红色的探针,选用GFP比较经典,两者叠合的橙色也是很多文献上常采用的。但如果是蓝色的探针,则选用**比较容易区分一点,比较好看,不过做这个的好像也不太多。
最后还有一点就是GFP的质粒比较多,很多还有EGFP序列,比如我们实验室的EGFP荧光就非常好看,所以我还是建议你选经典的GFP\EGFP。祝实验顺利。
GFP:绿色荧光蛋白,Green Fluorescent Portein。
EGFP:增强型绿色荧光蛋白,Enhanced Green Fluorescent Protein ,64Phe→Leu ,发射出的荧光强度比GFP大 6 倍以上。
copgfp:从copepoda Pontellina plumata (Arthropoda; Crustacea; Maxillopoda; Copepoda)获得的绿色荧光蛋白CopGFP,亮度是EGFP的1.3倍。
turboGFP:从copGFP改进,具有超快速蛋白成熟,适合早期信号检测,超明亮绿色荧光,易于检测,不聚集,融合情况下表现非常好,稳定表达,适合稳定细胞系生产,在多种温度范围内表达(20℃-38℃),适合冷血动物的特点。
colver:从Aequorea victoria GFP构建的最明亮的荧光蛋白,参考文献:Lam A J, St-Pierre F, Gong Y, et al. Improving FRET dynamic range with bright green and red fluorescent proteins[J]. Nature methods, 2012, 9(10): 1005-1012.目的是用于替代CFP和YFP。
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