nest PCR中的内外引物分别是什么意思？什么是外引物，内引物

一段序列顺序为1-2-3-4，目的片段为2、3之间，先用1、4引物对扩增，然后用扩增产物为底物，用2、3引物对再次扩增，就是巢式PCR了。1、4引物对就是外引物，2、3引物对就是内引物。

PCR引物和测序引物有什么区别

简单的说上游引物就是和要扩增基因片断上游序列结合的引物,下游引物指与目的基因片断下游序列结合者.

上游引物：DNA分子两端不一样，因为核苷酸分子不是对称的，5'位有个磷酸，3'位是-OH 就是：磷酸端和羟基端。DNA复制总是从5’端到3’端，因为DNA聚合酶只能往3’端加核苷酸。

下游引物：是沿着正链进行延长的。体外扩增DNA，双螺旋是部分或完全打开的，不存在冈崎片段，也不会一段段延长，理论上正反引物都是不间断延长的，和体内DNA自我复制是有区别的。

判断是上游引物还是下游引物的方法：是谁先复制谁是上游，往后的就是下游，上游下游是个相对概念，是某一个序列／碱基相对于另一个序列／碱基而言的。

扩展资料

引物（Primer）在聚合作用的起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中，引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

上游引物：Forward primer，F-引物，又称为正向引物；下游引物：Reverse primer，R-引物，又称为反向引物。

参考资料: 百度百科-反向引物

参考资料: 百度百科-上游引物

一、定义不同：

PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

测序引物分自带引物和通用引物，自带引物为客户自行设计的PCR扩增引物或者载体及目的片段上设计的引物进行测序。

二、作用不同：

通用引物一般在购买载体时公司提供，一般测序引物如T7、SP6、M13等测序公司免费使用。

不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的地方。PCR又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

三、适用不同：

PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端。

测序必须为特异性引物，不能为随机、兼并、不纯、带荧光标记、长度过长引物.测序引物长度一般要求在18-25BP，最长不超过30BP..PCR引物要求相对低一些.简单说来就是PCR引物可以用来扩增但是不一定适合测序。

扩展资料：

PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。

引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因为这样会使引物在GC富集序列区错误引发。

百度百科-引物

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