wb蛋白样品弄混怎么区分
区分不了,除非有分子测定仪可以测定出分子质量和构成来确定哪种蛋白是哪种蛋白,否则的话只能重新做一份了,下次一定注意把WB蛋白的区别放置,当进行接触滤纸、凝胶和膜的操作时,应戴手套。手上的油脂会阻断转移,提蛋白一定要过硬,不能吝惜蛋白酶抑制剂,测定蛋白浓度一定要选好方法,最重要的,wb的成功最大程度的依赖于sds-page,最好有预染marker。
拓展内容:
有效的样品制备是影响WB可重复性的非常重要的因素。需考虑以下问题:
1、靶蛋白是可溶/不可溶蛋白,细胞质/膜蛋白?
2、溶解的蛋白或其翻译后修饰的维持是否需要添加额外的缓冲成分(例如洗涤剂、酶抑制剂)?
3、蛋白质定量的方法是什么,缓冲成分会干扰蛋白定量吗?BCA蛋白定量检测法是总蛋白质定量的常用方法,其蛋白间差异较考马斯染料法的更小,但与还原剂、螯合剂不兼容(兼容去垢剂)。
小分子量蛋白的转膜需要注意:
(1)高浓度的凝胶有利于小分子量蛋白的分离。一般在目的蛋白离凝胶前沿0.5-1cm时停止电泳,太靠近凝胶前沿易引起边缘效应。
(2)SDS阻止蛋白与膜的结合,小蛋白更是如此。因此电转液中可以不加SDS。
(3)保持甲醇浓度20%。
大分子量蛋白的转膜需要注意:
(1) 而甲醇易使SDS从蛋白上脱离,因此适当降低甲醇浓度至10%或更低,防止蛋白沉淀。
(2) 降低电转液中甲醇的含量,这样可以促进凝胶的膨胀,更易于大分子量蛋白的转出。
(3) 使用硝酸纤维素膜时,甲醇是必需的。如果是PVDF膜,甲醇可以不必加入电转液,但需要预先用甲醇活化。
SDS是一种阴离子除垢剂,可以在不开二硫键的情况下分离寡聚蛋白的不同亚基。如果想让二硫键打开,必须用2-巯基乙醇或过氧酸来处理它。
去脂能力很强的表面活性剂,因此常被应用在洗面奶中,因过强的清洁能力和高刺激性长期使用会严重降低皮肤防御能力,导致表皮细胞发育不成熟,结构松散,令表皮层变薄易受外界刺激且角质异化,引发脆弱敏感、毛孔粗大、肤色暗沉、痘痘滋生、衰老等一系列问题!
扩展资料:
作用:
十二烷基硫酸钠具有良好的乳化性 、 起泡性 、 水溶性 、 可生物降解、 耐碱 、 耐硬水, 并且在较宽 pH 值的水溶液中的稳定性和易于合成 、 价格低廉等特点 。
一直被广泛地应用于化妆品、 洗涤剂、 纺织 、 造纸、润滑以及制药、建材、化工、采油等工业 , 还可应用于正负离子表面活性剂复配体系的性质 、 胶团催化 、 分子有序组合体等基础研究方面 。
用途一用作洗涤剂和纺织助剂,也用作牙膏起泡剂、矿井灭火剂、乳液聚合乳化剂、羊毛净洗剂等。
用途二用作阴离子型表面活化剂、乳化剂及发泡剂。
用途三GB 2760-96规定为食品工业用加工助剂。发泡剂;乳化剂;阴离子型表面活性剂。用于蛋糕、饮料、蛋白、鲜果、果汁饮料、食用油等。
百度百科-十二烷基硫酸钠
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