用PAGE胶跑DNA
首先原理差不多,具体细节差异还是有的。
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯。
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)
但是跑DNA一般用 TBE(Tris 、硼酸、EDTA),还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer。蛋白较一般有分离胶和浓缩胶。
浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳。
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢。
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