rtpcr需要多少个细胞的rna
朋友你好!
如果用293T细胞那么12孔板一个孔的细胞量就够,但293T属于细胞个体小且长得比较密比较多的那种,如果换做HeLa或者更大更稀的其他细胞,那还是6孔板或者35mm小皿更保险。总之你提完RNA要测浓度,如果出现低于标准范围或平行孔之间/处理与对照之间相差过大,就说明你细胞量太少或操作有问题,就不必再反转录了。RT-PCR用的试剂比较贵也比较耗时,相比之下细胞还是多点保险,毕竟RNA浓度高了还可以稀释对吧
希望帮到你
做pcr,rtpcr和做克隆基因的引物有何不同
区别是:
1、rtpcr是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术,
2、RT-LAMP是一种将环介导等温扩增(LAMP)以及反转录相结合,直接检测出RNA的技术。
不同点很多。最简介回答,是目的不同,侧重点也不同:
普通pcr。只考虑能不能扩增出来就行。
rtpcr。上荧光的话,对引物质量要求高,得做个hplc或者page纯化;其次对引物设计要求高,考虑得率,特异性等因素。
克隆引物。考虑加入常见酶切位点,导入何种目的载体,碱基密码子偏好性等。
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