常用的蛋白质电泳技术有哪些?试举例说明它们在生化研究中的应用
1、农业生产:土壤的保肥作用.土壤里许多物质如粘土,腐殖质等常以胶体形式存在.
2、医疗卫生:血液透析,血清纸上电泳,利用电泳分离各种氨基酸和蛋白质.
3、日常生活:制豆腐原理(胶体的聚沉)和豆浆牛奶,粥,明矾净水.
4、自然地理:江河人海口处形成三角洲,其形成原理是海水中的电解质使江河泥沙所形成胶体发生聚沉.
5、工业生产:制有色玻璃(固溶胶),冶金工业利用电泳原理选矿,原油脱水等.
还如:
①土壤里发生的化学过程。因土壤里许多物质如粘土、腐殖质等常以胶体形式存在。
②国防工业的火 药、炸 药常制成胶体。
③石油原油的脱水、工业废水的净化、建筑材料中的水泥的硬化,都用到胶体的知识。
④食品工业中牛奶、豆浆、粥都与胶体有关。
分子生物学实验指导的目录
带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。
1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早发现。
1936年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ,分离了马血清白蛋白的3种球蛋白,创建了电泳技术。
电泳应用:
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。
聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。
其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用.
2、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量。
3、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。
电泳后的凝胶经凝胶扫描仪扫描,从而给出定量的结果.凝胶扫描仪主要用于对样品单向电泳后的区带和双向电泳后的斑点进行扫描。
4、电泳可用于检查蛋白质制剂的纯度,分析蛋白质混合物的组分。
扩展资料:
电泳基本原理:
生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。
在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。
如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律。
这里v是在介质粘度为η中半径为r的颗粒的移动速度。但在凝胶中,这种抗衡并不完全符合Stokes定律。F取决于介质中的其他因子,如凝胶厚度,颗粒大小,甚至介质的内渗等。
电泳迁移率(mbility)m规定为在电位梯度E的影响下,颗粒在时间t中的迁移距离d。
迁移率的不同提供了从混合物中分离物质的基础,迁移距离正比于迁移率。
百度百科-电泳
第一篇 常用分子生物学实验技术及原理
第一章 载体
第二章 分子生物学中常用的工具酶
第三章 电泳
第四章 真核生物基因组文库的构建
第五章 eDNA文库的构建
第六章 DNA序列测定
第七章 PCR基因扩增
第八章 基因表达
第九章 印迹法及分子检测
第十章 克隆化DNA的定点突变
第十一章 mRNA差异显示技术
第二篇 学生实验
实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化
实验二 质粒DNA的提取及其定性定、量分析
实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
实验四 PCR基因扩增及扩增产物的回收
实验五 DNA重组
实验六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测
实验七 蛋白质印迹
实验八 哺乳动物基因组DNA的分离和分析
实验九 植物基因组DNA的提取
实验十 大肠杆菌基因组DNA的提取
实验十一 植物总RNA的提取
实验十二 RT—PCR(反转录一聚合酶链反应)
实验十三 PCR法差异显示mRNA
实验十四 利用聚合酶链反应(PCR)定点突变
实验十五 寡核苷酸介导的定点突变
实验十六 Southern杂交
实验十七 双脱氧链终止法测定DNA序列
实验十八 DNA核苷酸序列分析——银染色法
附录
一、常用核酸、蛋白质换算数据
二、氨基酸符号及相应密码子
三、常见市售酸碱的浓度
四、离心机转速与相对离心力的换算
五、常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液
六、常用限制酶酶切位点及缓冲液
七、分子生物学常用试剂和缓冲液的配制
八、常用细菌培养基和抗生素溶液
九、x光底片的冲洗方法
十、溴化乙锭溶液的净化处理
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